前言
子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma)又稱子宮體癌，原發(fā)于子宮內(nèi)膜上皮，是女性生殖道三大惡性腫瘤之一，約占女性癌癥總數(shù)的7％，占女性生殖道惡性腫瘤的20％~30％，其發(fā)病率有明顯上升趨勢。發(fā)病年齡漸趨年輕化，小于40歲患者的比例由過去的1％～8％上升至13.3％。子宮內(nèi)膜癌是女性圍絕經(jīng)期出血的重要原因，易誤診為月經(jīng)不調(diào)而延誤診斷，其病因迄今尚未明確，但主要與雌激素的長期刺激有關(guān)。用于復(fù)制子宮內(nèi)膜癌的動物主要是免疫缺陷小鼠，少數(shù)采用裸大鼠。
部分造模方法
使用動物：裸鼠
【造模機制】：
1.將人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞注射于裸鼠皮下或者子宮腔，分別建立皮下瘤和原位瘤?？捎镁G色熒光蛋白標(biāo)記細(xì)胞，活體觀察腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。
2.將人原發(fā)子宮內(nèi)膜癌手術(shù)切除標(biāo)本移植到裸鼠皮下建立動物模型。
【造模方法】：
1.小鼠
⑴選4~5周齡BALB/c-nu/nu裸鼠，雌性，體重10~12g。人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株(lshikawa細(xì)胞株，HEC-1A或者HEC-1B細(xì)胞株)，取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實驗。
⑵模型制備：消化收集人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞，分別以800r/min離心5~8分鐘，棄上清液，按接種濃度5×107/0.1ml稀釋細(xì)胞。消毒裸鼠左下肢近腹股溝皮膚處，接種后每天觀察注射點有無破潰紅腫，以皮下結(jié)節(jié)直徑超過0.5cm為成瘤標(biāo)準(zhǔn)，2周左右成瘤。至腫瘤長至1cm3時取出瘤組織塊，于含10％胎牛血清的培養(yǎng)液。將組織塊切成1.5mm×1.5mm×3mm瘤塊，分別以小切口方式及無菌套管針進(jìn)行皮下接種，小切口絲線縫合1針。置于恒溫消毒的獨立通風(fēng)籠盒內(nèi)，觀察裸鼠成瘤情況，每3天以游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小1次，至接種后45天，并進(jìn)行病理檢查。
⑶模型檢測：①體內(nèi)成瘤生長曲線的測定：測裸鼠體重和腫瘤體積，并用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長(L)、寬(W)、高(H)，腫瘤體積(V)按公式計算：V=π/6(L×W×H)，單位為厘米(cm)。部分腫瘤組織用10％甲醛固定，部分腫瘤組織儲存在液氮中備用。②移植瘤的病理學(xué)檢查：處死荷瘤裸鼠后，觀察移植瘤的形態(tài)，取新鮮腫瘤組織進(jìn)行組織學(xué)測定及常見癌基因的免疫組織化學(xué)的檢測。③移植瘤DNA倍體檢測：新鮮的腫瘤組織塊，直徑約5mm，在200目銅網(wǎng)上稍用力摩擦，將其制備成單細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞儀測定，以子宮癌細(xì)胞株的檢測結(jié)果作為對照。④癌基因的免疫組化檢測：子宮癌細(xì)胞株的檢測結(jié)果作為對照。
2.大鼠 選裸大鼠。凍存Ishikawa細(xì)胞復(fù)蘇后，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，在裸大鼠后肢近腹側(cè)的疏松皮下做一皮丘，內(nèi)含0.5ml細(xì)胞懸液(1×106個）。2周后，將腫瘤修剪成2mm3瘤塊，放入盛有等滲生理鹽水的平皿中并置于冰上備用。裸大鼠麻醉后， 將其下腹正中做一長約2cm切口，暴露雙側(cè)子宮，切開左側(cè)子宮中上1/3處子宮前壁全層，用顯微鑷將瘤塊植入宮腔。
【模型特點】：
荷瘤裸鼠晚期明顯消瘦，活動力、反應(yīng)力均下降，出現(xiàn)惡病質(zhì)，直至衰竭死亡。由接種皮下瘤組織塊的第二代移植瘤生長曲線可知，接種組織塊在短時期內(nèi)即可觀察到腫瘤的膨脹性生長通過對比可觀察到腫瘤組織塊鼠間移植的第二代腫瘤比原代細(xì)胞液中的皮下腫瘤生長速度快。裸大鼠皮下瘤生長2周時行低齡裸大鼠宮腔原位移植，成瘤率可達(dá)70％。
【模型的評估和應(yīng)用】：
通過建立人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株小鼠皮下移植瘤模型，模擬人體子宮內(nèi)膜癌的生長環(huán)境，符合人體子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)特點，可以作為探索人子宮內(nèi)膜癌中藥治療及生物治療和客觀評價治療手段效果的合適的動物模型。裸大鼠宮腔原位移植后3~4周腫瘤生長局限在子宮內(nèi)，肉眼既能探及腫瘤又不發(fā)生轉(zhuǎn)移，這恰好符合人類早期子宮內(nèi)膜癌的臨床特點。裸大鼠體型、器官血管等都較裸小鼠大，更適于體內(nèi)實驗研究的復(fù)雜操作，尤其是其盆腔血管較粗大，可用于人類腫瘤介入治療的實驗研究。
參考文獻(xiàn)：
1.孟麗榮，張淑蘭，魯艷明，等．建立人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤模型及其生物學(xué)特性的探討．中國腫瘤臨床，2007,34(22): 1306-1312
2.賈玖麗，馬曉欣，柯孝瑜．人子宮內(nèi)膜癌瘤組織塊活體移植瘤動物模型的建立．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013,21(4):727-730
3.徐潔，程明軍，周文江，等．裸大鼠人子宮內(nèi)膜癌模型的建立和評價．現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2008, 17 (7):497-500
4.Cabrera S,Llauradó M,CasteUví J,et al. Generation and characterization of orthotopic murine models for endometrial cancer. Clin Exp Metastasis,2012, 29 (3): 217-227
號二維碼.jpg)
