前言

腎盂腎炎(pyelonephritis)又稱上尿路感染，是病原微生物侵入腎盂、腎間質(zhì)和腎實質(zhì)所引起的炎癥性病變，好發(fā)于女性，男：女為1 : 10。根據(jù)臨床病程及癥狀，腎盂腎炎可分為急性及慢性兩期。急性腎盂腎炎若治療不當(dāng)?？蓮?fù)發(fā)或轉(zhuǎn)為慢性，最終進(jìn)入慢性腎功能不全階段。雖然隨著疾病譜的變化，以腎盂腎炎為基礎(chǔ)病變導(dǎo)致慢性腎功能不全的比例逐漸下降，但腎盂腎炎的發(fā)病率、復(fù)發(fā)率以及急性腎盂腎炎的轉(zhuǎn)慢率并未見降低。因此，制作與人類腎盂腎炎相似的動物模型，從發(fā)病機制上認(rèn)識腎盂腎炎，研究行之有效的治療方案是一項很有意義的工作。

部分造模方法

使用動物：小鼠

【造模機制】：

大腸埃希菌由膀胱經(jīng)不完全梗阻輸尿管逆行感染，早期可致單側(cè)急性腎盂腎炎病變，晚期可致慢性腎盂腎炎病變。病理可見患側(cè)腎臟變性萎縮，機體細(xì)胞免疫功能紊亂，抑制性T細(xì)胞功能低下，免疫球蛋白lgA、lgM增加，免疫活性細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致腎臟免疫病理損傷，造成腎組織結(jié)構(gòu)的溶解，最終腎臟完全萎縮。

【造模方法】：

1.動物 選用雄性C57BL/6J小鼠（體重18~20g）。

2.模型制備 造模前制備菌液，大腸埃希菌采用O111B4標(biāo)準(zhǔn)菌株，肉湯培養(yǎng)基，并對大腸埃希菌進(jìn)行鑒定。在接種動物前，將細(xì)菌接種于 一只小鼠腎臟，24小時取患腎細(xì)菌，將該增毒后的細(xì)菌溶于無菌鹽水中，用比濁法調(diào)菌液濃度為2×106~6×106/ml，立即接種模型動物。小鼠術(shù)前禁水24小時，常規(guī)消毒，下腹部正中切口1.0cm。暴露右側(cè)輸尿管，用縫合線將其拉向右側(cè)，并固定于腹壁外；擠出膀胱內(nèi)殘尿，向膀胱內(nèi)注入大腸埃希菌懸液約0.2ml，縫合腹部切口，24小時后拆去右側(cè)腹壁外輸尿管的固定線。單純梗阻組：手術(shù)后膀胱內(nèi)不注射菌液，以等量生理鹽水代替。

3.樣本采集和指標(biāo)測定 術(shù)后6、12、24、48小時，3、5、7、15、30天，2、3、4、5個月處死；單純梗阻組分別術(shù)后1、3、5天處死。

4.觀察指標(biāo) ①腎臟重量：稱量雙腎重囂，計算所占體重比。②細(xì)菌培養(yǎng)：尿及心臟血液定性培養(yǎng)。雙腎按1g腎重量相當(dāng)于1ml鹽水體積計算，補加鹽水至1ml，制成勻漿，系列稀釋后定量培養(yǎng)，以每毫克腎組織所占的細(xì)菌數(shù)（個/mg)，表示腎臟菌量。③血清檢測：用單向擴散法將羊抗鼠IgG制成瓊脂擴散板，打孔向孔中加入血清，以擴散環(huán)直徑表示血清IgG相對含量。④血清大腸埃希菌凝集效價測定：將大腸埃希菌O111B4溶于5％甲醛，用比濁法使其濃度為1012/ml，將血清倍比稀釋，玻片凝集，以凝集的最大稀釋倍數(shù)表示血清抗大腸埃希菌凝集效價。⑤腎臟形態(tài)觀察：取部分腎組織，立即固定于10％中性甲醛24小時以上，常規(guī)石蠟切片，H&E染色觀察腎臟組織結(jié)構(gòu)改變。動物處死后迅速分離腎臟，并立即凍于液氮中，冷凍切片，丙酮固定，檢測IgG沉積及菌體抗原存在。

【模型特點】：

1.此模型可觀察從急性感染到慢性萎縮整個腎盂腎炎發(fā)展的全過程。尿細(xì)菌培養(yǎng)6小時起即出現(xiàn)陽性，一直持續(xù)到30天?；寄I感染2天內(nèi)腎盂黏膜即出現(xiàn)廣泛性化膿灶，髓質(zhì)可見不同程度中性粒細(xì)胞浸潤；7天后病變面積更加廣泛，出現(xiàn)化膿灶和壞死灶30天轉(zhuǎn)為慢性炎癥細(xì)胞彌漫性浸潤；60天轉(zhuǎn)為局灶性；90天后患腎極度萎縮，腎組織嚴(yán)重破壞。免疫組化染色觀察30天菌體抗原lgG有沉積，至90天仍有IgG沉積。

2.該模型動物健康側(cè)的腎臟未患病，便于從感染機會、變化程度、腎臟重量等方面形成良好的自身對照。健康腎可代償，進(jìn)行長期觀察。健康腎始終未見lgG沉積，未受病變累及，說明本模型無自身免疫因素的參與。人類腎盂腎炎大多為大腸埃希菌逆行感染，且病變多為單側(cè)或一輕一重，形成慢性腎盂腎炎，多有梗阻、反流等因素存在。故此模型代表性強。

3.由于小鼠能長期存活，能夠動態(tài)觀察，便于獲得每個階段的血清學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)等多學(xué)科材料，為慢性腎盂腎炎的基礎(chǔ)研究及防治提供了良好的實驗動物模型。

【模型評估和應(yīng)用】：

腎盂腎炎是泌尿系統(tǒng)常見病、多發(fā)病，慢性腎盂腎炎由于病程長、反復(fù)發(fā)作，防治難度大，多預(yù)后不理想。單側(cè)逆行性大腸埃希菌感染的慢性腎盂腎炎模型從致病菌、感染途徑、病理和免疫改變等方面均與人類慢性腎盂腎炎相似，造模方法簡單，重復(fù)性好，感染率高，病變顯著且均一，是研究人類慢性腎盂腎炎病理變化及病變機制的理想動物模型。

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