前言

角膜新生血管(ehoroidal neovascularization,CNV)常導(dǎo)致角膜透明度降低，是致盲的一個重要原因，也是角膜移植術(shù)后發(fā)生排斥反應(yīng)的高危因素。臨床上CNV治療仍是最棘手的問題之一。CNV動物模型屬于誘發(fā)性疾病動物模型，通過物理方法（熱燒烙術(shù)和角膜縫線法等）、化學(xué)方法（堿性化學(xué)藥物燒傷等）、生物方法（角膜囊袋鑒定法）和手術(shù)方法（異種角膜移植、角膜基質(zhì)內(nèi)注射牛清蛋白、角膜基質(zhì)腫瘤組織植入術(shù)等）可人為地誘發(fā)動物的角膜新生血管增生，產(chǎn)生類似于人類疾病的模型。下面主要介紹角膜新生血管研究最常用的方法——角膜囊袋鑒定法。常用的誘導(dǎo)劑有內(nèi)毒素、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、二氧化硅等，以緩釋內(nèi)毒素和bFGF緩釋藥丸誘生角膜新生血管動物模型的制作為例，進(jìn)行簡單介紹。

部分造模方法

使用動物：實驗動物

【造模機(jī)制】：

內(nèi)毒素誘生的CNV繼發(fā)于炎癥反應(yīng)，并且炎癥刺激反應(yīng)與新生血管的誘生呈正相關(guān)，內(nèi)毒素誘生新生血管過程可能受巨噬細(xì)胞分泌的bFGF因子調(diào)控，并且被巨噬細(xì)胞分泌的其他因子如腫瘤壞死因子-α和轉(zhuǎn)化生長因子-β放大。

bFGF是包含146個氨基酸具有復(fù)雜功能的單鏈膚，在一系列體外實驗中，被證實具有對血管內(nèi)皮細(xì)胞分化、增殖、遷移和趨化作用。bFGF誘導(dǎo)的微血管內(nèi)皮細(xì)胞可產(chǎn)生大量的µ-PA，在血管生成早期起中心作用，µ-PA將纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)化成具有酶活性的纖維蛋白溶酶，后者又可激活膠原酶，溶解新生血管起始緣的基膜，并導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入三維的膠原基質(zhì)，形成新的毛細(xì)血管芽。

【造模方法】：

緩釋內(nèi)毒素聚合物藥丸的制備：乙烯－醋酸－乙烯脂聚合物(Elvax)珠采用高純的己醛清洗至分光光度純，在室溫下將聚合物溶于二氯甲烷至10％(W/N)最終濃度，將一定比例E.Coli內(nèi)毒素與10％Elvax混合并強(qiáng)力攪拌至均勻懸液。內(nèi)毒素－Elvax懸液用消毒滴管滴入8孔玻璃板聚合，完全聚合后，制成1mm³大小，（1.3±0.3)mg/丸，紫外線消毒后-40℃儲藏備用。

bFBF緩釋藥丸的制備：bFBF緩釋藥丸由緩釋劑聚甲基丙烯酸－2－羥乙酯(Hydron)和一定量的誘導(dǎo)劑bFGF混合而成，在bFGF-Hydron緩釋藥丸中加入一定量的硫糖鋁(sucralfate)，制成Hydron包裹的bFGF-sucralfate緩釋藥丸，可有效地穩(wěn)定bFGF的生物活性，減緩bFGF的釋放。

角膜囊袋制作：所有手術(shù)步驟均在無菌條件下進(jìn)行，3％戊巴比妥鈉兔耳緣靜脈注射全身麻醉(25mg/kg), 1％地卡因局部點眼麻醉，在角膜中央作1.5mm、1/2角膜厚度切口，向6點位潛行分離1/2厚角膜囊袋，至距角膜緣2.0mm處，采用玻璃套管植入制備好的緩釋藥丸，將囊袋切口重新復(fù)位，以便愈合。

【模型特點】：

CNV與局部內(nèi)毒素呈劑效依賴關(guān)系。用濃度為15％內(nèi)毒素聚合物能獲得顯著的角膜新生血管生長，僅伴有輕微的角膜水腫，能誘生適宜的CNV動物模型，內(nèi)毒素濃度過高則引起顯著的角膜炎癥，基質(zhì)混濁而且新生血管生長易融合，影響新生血管測量和計算的準(zhǔn)確性，濃度太低則誘導(dǎo)力度過小，不適合模型的要求。

【模型評估和應(yīng)用】：

緩釋內(nèi)毒素聚合物藥丸誘生CNV模型的優(yōu)點是：新生血管定向成束生長， 重復(fù)穩(wěn)定，測定和定量分析的準(zhǔn)確性明顯提高，并且可采用計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行每日連續(xù)動態(tài)定量測定，方便與對照組比較。

bFGF緩釋藥丸誘生的CNV動物模型的優(yōu)點在于：bFGF作為新生血管的直接刺激因子，可排除炎癥等間接新生血管刺激因素，這對于特定的新生血管抑制劑的療效評價有重要意義；便于定量分析；穩(wěn)定性和重復(fù)性俱佳且經(jīng)濟(jì)實用。

參考文獻(xiàn)：

1.邱培瑾. 角膜新生血管的動物模型．國外醫(yī)學(xué)：眼科學(xué)分冊，2000, 24 (6):360-363

2.胡東東，王嘉容，楊在富．激光眼損傷動物校型研究進(jìn)展．軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2010,5:489-491

3.聶愛芹，席苗，席興華，等單純疤疹病毒性角膜炎Ⅱ鼠模型的建立及鑒定國際眼科雜志，2012,12(11): 2059-2061

4.徐巖變應(yīng)性結(jié)膜炎動物模型眼科研究，2001, 19(2):181-183

5.魏瑞華，郝永娜，趙少貞．自身免疫相關(guān)性干眼動物模型的研究進(jìn)展．眼科新進(jìn)展，2012, 32 (7):690-693

6.Calonge MC, Pastor JC, Herreras JM, el al. Pharmacologic modulation of vascular permeability in ocular allergy in the rat. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1990, 31 (1): 176-180

7.Marquart ME.Animal models of bacterial keratitis.J Biomed Biotechnol,2011,2011:680642

8.Pavan-Langston D. Herpes simplex virus ocular infections:current concepts of acute, latent and reactivated disease. Trans Am Ophthalmol Soc, 1990,88:727-796